Deoxyribonuclease 脫氧核糖核酸酶RNA提取

                                                             Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I

本品來(lái)自牛胰腺，色譜純化制備，常用于去除蛋白或RNA樣品中的DNA，或者用于向DNA中引入缺口使標(biāo)記堿基插入DNA。本品以含氯化鈣的凍干粉形式供應(yīng)，比活≥2000Kunit Units/mg蛋白。

Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I產(chǎn)品特性

　　1)CAS NO：9003-98-9

　　2)蛋白純度：≥80%(biuret)，色譜純化

　　3)比活力：≥2000Kunit

　　Units/mg protein

　　4)活力定義：25℃，pH5.0條件下DNase催化底物DNA，使每毫升每分鐘ΔA260增加0.001的變化定義為一個(gè)酶活力單位(Kunitz unit)。

　　5)激活劑：多種二價(jià)金屬離子如Mg2+、Mn2+、Ca2+、Co2+、and Zn2+

　　6)抑制劑：β-巰基乙醇;螯合劑;SDS;肌動(dòng)蛋白;并沒(méi)有特異性抑制DNase I酶活的通用抑制劑，比如檸檬酸鹽抑制Mg2+活化的DNase I，但不能影響Mn2+激活的DNase I。

　　7)溶解性：溶于0.15M NaCl(5mg/ml)，無(wú)色透明溶液

　　保存與運(yùn)輸方法

　　保存：凍干粉-20℃干燥凍存，至少3年穩(wěn)定。

　　運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

　　常見(jiàn)問(wèn)題

　　1. 如何溶解DNase I粉末?

　　將本品溶解于0.15 M NaCl溶液，可配置成5-10

　　mg/ml的儲(chǔ)存液，-20℃分裝凍存。需要注意：本品儲(chǔ)存液即使-20℃分裝凍存，一周可能會(huì)有<10%活力損失;置于2-8℃，約會(huì)有20%活力損失。

　　2. 如何將本品活力換算成質(zhì)量?

　　根據(jù)本品各批次的比活力和蛋白含量，比如當(dāng)酶比活力為2000 Kunits/mg，蛋白含量為(biuret)也，那么15KU=15000Kunits/2000Kunits/mg/=7.5mg本品。

　　3. 使用多大濃度DNase I用來(lái)去除溶液內(nèi)的DNA?

　　在含50mM Tris-HCl(pH7.5)，10mM MgCl2的溶液體系內(nèi)，加入20-50μg DNase I，并于37℃孵育60min以去除DNA污染。本用量?jī)H作參考，具體實(shí)驗(yàn)請(qǐng)做適當(dāng)調(diào)整。

Deoxyribonuclease I (DNase I) 脫氧核糖核酸酶I描述

　　脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫(xiě)DNase I，在大多數(shù)細(xì)胞和組織中都能發(fā)現(xiàn)的一種核酸內(nèi)切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產(chǎn)生5’端為磷酸基團(tuán)、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產(chǎn)物zui小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機(jī)識(shí)別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點(diǎn);而在Mn2+存在條件下，DNase I識(shí)別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點(diǎn)進(jìn)行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質(zhì)(其切割速率受組蛋白影響)。

的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價(jià)金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護(hù)酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來(lái)的1/2。

Deoxyribonuclease  脫氧核糖核酸酶RNA提取

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